细胞周期检测步骤

　　①细胞培养处理

　　用6孔板培养细胞，待细胞生长达到60%-70%，根据实验需求处理(比如加入药物)，继续培养;

　　②细胞收集

　　用胰酶消化细胞，吹打成单细胞悬液，800rpm离心5min,收集细胞沉淀，上清保留，用预冷PBS重悬细胞，制备成单细胞悬液;

　　③细胞固定

　　制备的单细胞悬液离心后，去除上清，加入2-3ml预冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上;

　　④细胞染色

　　1000rpm 离心5min 后弃上清，用2ml的PBS洗涤2次(注意避免Dnase污染),加入适量的周期染料，37C避光孵育30min;

　　⑤上机前过滤

　　PI具有很强的粘附性,容易形成细胞聚团，建议可以使用200目的筛网过滤样本后上机;

　　⑥上机分析

　　低速上样本，建议有效的单个细胞采集10000个以上;

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