细胞增殖及毒性检测注意的事项

　　1、接种细胞数：针对标准96孔板，贴壁细胞的最小接种量为1000个/孔 (100μl培养基)。若为白细胞，接种量不低于2500个/孔 (100μl培养基)。如若使用24孔板或6孔板，应预先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

　　2、空白对照：在不含细胞的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度即为空白对照。在细胞毒性实验中，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。

　　3、第一次做实验时，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和细胞达到实验要求的培养时间，这是因为不同的细胞生长速度不同。

　　4、培养板周围一圈孔培养液容易挥发，为减少误差，建议培养板周围的四边每孔只加培养基、PBS或水。

　　5、药物样本初筛时可以适当减少浓度梯度的数量，增大浓度梯度间的倍数。若要确定样本的IC50则需要增加浓度梯度的数量，一般8-12个足矣。若有文献参考，则根据文献设置浓度梯度。

　　6、加入样本时要注意溶解样本的培养基中血清浓度对样本的影响，部分样本可能受血清影响较大，此时需使用无血清培养基溶解样本。

　　7、加样本前，要先吸出前面的培养基，但不可长期搁置防止细胞死亡，最好一块板吸完，立即加入配好的不同浓度的样本。

　　8、Calcein-AM遇到湿气会分解，使用后请在-20度下密闭冷冻保存，防止水分进入。Calcein-AM储备液用缓冲液或培养基等稀释时尽量现配现用。

　　9、碘化丙啶(PI)有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。

       来源：网络